ペルシア軍100万人を300人のスパルタ軍が迎え討つ。続編『300＜スリーハンドレッド＞～帝国の進撃～』も作られた歴史アクション。
紀元前480年、大帝国ペルシアはスパルタの征服をもくろみ、ペルシア大王クセルクセスに服従の証しを立てるよう使者を送って迫る。だがスパルタ王レオニダスは要求を拒絶するとともに、エリートである強靭な戦士300人を集め、海岸線に連なる狭い山道に敵の軍団を誘い込み、戦いを自分たちに有利に展開させるという作戦を実行。そこに100万人からなるペルシアの大軍が押し寄せ、山道を舞台に壮絶な死闘が火蓋を切るが……。